1、水生生物毒性試驗中，對于在試驗系統(tǒng)中不穩(wěn)定的供試物，是否必須采用流水式試驗方法？如采用半靜態(tài)法，如何設(shè)定試驗液更換周期？
答：首先應(yīng)分析供試物在試驗系統(tǒng)中不穩(wěn)定的原因，并參考NY/T 3273和OECD GD 23采取相應(yīng)措施維持/優(yōu)化暴露濃度。試驗期間供試物在試驗系統(tǒng)中的濃度無法維持在80%~120%范圍內(nèi)時，應(yīng)選用流水式試驗方法或半靜態(tài)試驗方法（至少每24h更換試驗液），藻類試驗除外（應(yīng)采用靜態(tài)法）。
2、供試物易降解時，是否應(yīng)對母體和降解產(chǎn)物同時進(jìn)行濃度檢測？是否需將降解產(chǎn)物濃度換算成母體濃度后再進(jìn)行試驗結(jié)果分析與統(tǒng)計？
答：對于供試物在試驗體系中易降解的供試物，應(yīng)參考NY/T 3273 開展試驗，具體參考意見如下。
（1）供試物在試驗系統(tǒng)中半衰期<1h時，原藥可申請減免水生生物試驗資料，并提交主要代謝物的水生生物試驗資料；制劑試驗中，可將配制好的儲備液/試驗液放置一段時間（如至少6個半衰期，使90%以上母體轉(zhuǎn)化為代謝物）后再進(jìn)行染毒，試驗結(jié)果以主要代謝物的實測濃度計。無需將降解產(chǎn)物濃度換算成母體濃度進(jìn)行統(tǒng)計分析。
（2）供試物在試驗系統(tǒng)中半衰期在1~72h時，應(yīng)選用流水式試驗方法或半靜態(tài)試驗方法開展試驗。根據(jù)實際情況，還可包括降解產(chǎn)物毒性的測定。如測試制劑毒性時，可根據(jù)其有效成分原藥及其主要代謝物的毒性確定試驗方法。
①若母體毒性高于主要代謝物或與主要代謝物相當(dāng)，試驗結(jié)果以母體的初始實測濃度或?qū)崪y濃度的幾何平均值計。必要時，可增加濃度分析頻率，如測定暴露后12h的濃度。
②若主要代謝物毒性高于母體，可將配制好的儲備液試驗液放置一段時間使90%以上母體轉(zhuǎn)化為代謝物后再進(jìn)行染毒，試驗結(jié)果以主要代謝物的實測濃度計。
（3）供試物在試驗系統(tǒng)中半衰期>72h時，測定母體的毒性。
（4）試驗期間，應(yīng)采取措施確保樣品的采集和分析過程中母體不會再進(jìn)一步分解。
3、供試物在酸性條件下穩(wěn)定，中性或堿性條件下易水解，但酸性條件下的pH不滿足相關(guān)試驗準(zhǔn)則要求，此時是否可以調(diào)節(jié)試驗液pH?
答：pH的調(diào)節(jié)原則上不應(yīng)超出相關(guān)試驗準(zhǔn)則規(guī)定的范圍；可采用其他方式處理易降解問題，參考NY/T 3273、OECD GD 23 。
4、試驗液 pH很低時，是否需要調(diào)節(jié) pH 以滿足相關(guān)試驗準(zhǔn)則要求？
答：當(dāng)試驗液pH不滿足相關(guān)試驗準(zhǔn)則要求時，應(yīng)通過向儲備液中滴加HCI或NaOH等方式將pH調(diào)節(jié)至未加供試物之前的 pH 左右，再將儲備液稀釋到設(shè)定濃度開展試驗。
注：pH 調(diào)節(jié)方法應(yīng)確保儲備液濃度不會發(fā)生任何顯著變化，且不會引起化學(xué)反應(yīng)或供試物的沉淀。
5、由于供試物本身的特性導(dǎo)致試驗液硬度指標(biāo)不符合相關(guān)試驗準(zhǔn)則要求時，是否應(yīng)對試驗液的硬度進(jìn)行調(diào)節(jié)？
答：如未發(fā)現(xiàn)硬度變化對試驗結(jié)果有影響，可不予調(diào)節(jié)；若有影響，可采取合理方法進(jìn)行調(diào)節(jié)，但應(yīng)確保加入的試劑不會對受試生物產(chǎn)生毒性，不會使儲備液濃度發(fā)生顯著變化，且不會引起化學(xué)反應(yīng)或供試物的沉淀。
文章來源：《農(nóng)藥登記環(huán)境影響試驗常見問題解答》
